SUMO 蛋白酶切對(duì)照融合蛋白試劑也稱(chēng)為UIP蛋白酶，是一種具有較高活性的半胱氨蛋白酶，來(lái)源于酵母編碼的MIP1基因，其特異性識(shí)別UBL蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)－SUMO（Small Ubiquitin-Like Modifier）。SUMO蛋白酶能夠識(shí)別完整的SUMO序列，并依賴(lài)正確的蛋白質(zhì)構(gòu)象，僅有完整的序列，沒(méi)有正確的結(jié)構(gòu)，SUMO酶是不能對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行切割的。因此，該酶是目前切割特異性最的蛋白酶，可在較廣泛的作用溫度和PH范圍（pH7-9）內(nèi)發(fā)揮作用，切割的最佳溫度為30°C。SUMO蛋白酶的識(shí)別序列如下，切割位點(diǎn)位于QIGG之后 SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG

本公司生產(chǎn)的SUMO蛋白酶含有雙His標(biāo)簽，酶切后，可通過(guò)Ni-NTA Resin親和純化，很容易地將SUMO去除；雙His標(biāo)簽保證了，SUMO蛋白酶高親和力的結(jié)合Ni-NTA，以最大限度的去除SUMO蛋白酶。該SUMO蛋白酶分子量約26kD。

組分

組分名稱(chēng)數(shù)量

SUMO 蛋白酶(10 U/μl)100 μl

10XSUMO Buffer1 ml

單位定義

在1XSUMO Protease Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中，30°C反應(yīng)1h，剪切>85％的100pmol底物，所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。

儲(chǔ)存

SUMO蛋白酶置于-20°C可保存2年。

SUMO 蛋白酶切對(duì)照融合蛋白試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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