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簡(jiǎn)要描述:Bst 4.0 Basic Mix (液體預(yù)混)試劑,雅吉生物細(xì)胞ATCC引種,代次靠前,細(xì)胞活率高狀態(tài)好,售后完善,更多細(xì)胞系,原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑,elisa試劑盒歡迎新老客戶(hù)咨詢(xún)訂購(gòu)
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詳細(xì)介紹
Bst 4.0 Basic Mix (液體預(yù)混)試劑為單一組分的 MasterMix(2 倍濃度),包含了
反應(yīng)緩沖液、Mg
2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等,
使用時(shí)只需要加入引物、模板即可進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增。Bst
4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴(lài)于 RNA 模板的聚合酶活性
(逆轉(zhuǎn)錄),還具有依賴(lài)于 DNA 的聚合酶活性,因此無(wú)論
DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進(jìn)行高效的恒溫?cái)U(kuò)增。該
制品是進(jìn)行 LAMP 及 RT-LAMP 擴(kuò)增反應(yīng)的試劑。優(yōu)化
的反應(yīng)體系,確保快速的完成檢測(cè)試劑的反應(yīng)體系建立。
該系列產(chǎn)品不包含任何其它輔助染料,在 LAMP 的擴(kuò)增
搭配 OG 橙綠變色管進(jìn)行可視化變色反應(yīng)。除此外,該制品
還可以用于其它恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)驗(yàn),包括 CPA、SMAP 等。
組分
貨 號(hào) 名 稱(chēng) 規(guī)格
A3824-02 2xBst 4.0 Basic Mix 1ml
儲(chǔ)存:長(zhǎng)期保存制品于-20℃,保存 2 年。
使用實(shí)例(以 LAMP OG 橙綠變色為例)
橙綠變色染料(OG Dye)以?xún)龈傻男问筋A(yù)加在 8 聯(lián)管蓋
上(A3821)。在 LAMP 反應(yīng)完畢后(在反應(yīng)完畢前,務(wù)
必不能將管蓋上染料混入反應(yīng)液中),將 0.2ml EP 管顛倒
溶解 OG 染料后。LAMP 的反應(yīng)產(chǎn)物將與 OG 染料形成強(qiáng)
烈的綠色肉眼可見(jiàn)變色反應(yīng)(陽(yáng)性),而未發(fā)生擴(kuò)增的 EP
管為深橙色(陰性)。
(1)配制反應(yīng)體系
在 0.2ml EP 反應(yīng)管中加入下述試劑
2xBst 4.0 Basic Mix 10 μl
*10xLAMP Primer Mix 2 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 20 μl
*10xLAMP Primer Mix 濃度:FIP/BIP 分別為 16 μM、
LoopF/B 分別為 4 μM、F3/B3 分別為 2 μM
全部試劑加入完畢后,輕彈 EP 管底部后,再蓋上 OG 橙綠
變色管(蓋上管蓋后務(wù)必不能再劇烈混合與倒置,以防止將
管蓋上的 OG 染料溶解,OG 染料一旦混入反應(yīng)液中
將會(huì)終止 LAMP 反應(yīng))。
實(shí)驗(yàn) LAMP Primer Mix 分別采用 1、1.5、2 μl,以陰
性不變色,陽(yáng)性樣品正常變色為標(biāo)準(zhǔn),作為后續(xù)測(cè)試用量。
(2)反應(yīng)體系配好后,置于 60~68°C(實(shí)驗(yàn)采用
65°C)進(jìn)行反應(yīng) 20~45min。(擴(kuò)增良好的引物組合,通
常 25min 即可變色,一般不超過(guò) 45min,實(shí)驗(yàn)設(shè)置
20、25、30、45min)。
(3)觀察結(jié)果:觀察結(jié)果時(shí),盡可能不要與配制反應(yīng)空
間共用,以防止污染操作臺(tái)。將反應(yīng) EP 管倒置,并手腕
輕甩,反應(yīng)液浸泡 EP 管蓋上的 OG 染料,靜置 30s。再
將 EP 反應(yīng)管正置,并輕甩反應(yīng)液到 EP 管底部,此時(shí)擴(kuò)
增樣品將變?yōu)轷r艷肉眼可見(jiàn)綠色,而陰性未發(fā)生擴(kuò)增的管
將為深橙色。
注意事項(xiàng)
1. 在用于其它恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)時(shí)(如 CPA、SMAP 等),
可參考如上策略進(jìn)行使用,反應(yīng)時(shí)間可能會(huì)需要調(diào)整。
2. 關(guān)于礦物油的使用,在配制完 LAMP 反應(yīng)體系后,可
加入一滴礦物油覆蓋于反應(yīng)液上部,以減少氣溶膠的污
染。
3. 鑒于特殊的生產(chǎn)工藝,HaiGene 全系恒溫?cái)U(kuò)增 Mix 系
列均不能進(jìn)行濁度分析。
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