細胞名稱：MPASMC小鼠肺動脈平滑肌細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)條件：

RPMI-1640＋10% FBS＋0.05mM β-巰基乙醇＋1% 雙抗

到貨處理

用75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部，觀察細胞生長情況。

1.不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞放入 37℃培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2.通過離心的方式收集細胞，然后將細胞沉淀加入5-8ml的培養(yǎng)基輕輕吹打均勻后移入新的T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

培養(yǎng)時的注意技巧

1.換液前將培養(yǎng)瓶豎在培養(yǎng)箱靜置1小時左右，輕輕吸掉3ml左右培養(yǎng)基，然后加入3ml的新鮮培養(yǎng)基，混勻后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.如果細胞密度比較稀，培養(yǎng)基沒有明顯變化，可以加入500ul的FBS混勻后，豎著培養(yǎng)。

3.傳代時，先按照換液步驟處理，吸掉3ml左右培養(yǎng)基后，加入10ml的新鮮培養(yǎng)基，混勻后分2個T25培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。

4.培養(yǎng)一周左右可以離心一次，以去除一些死細胞。

5.該細胞比較脆弱，培養(yǎng)過程中不要頻繁拿出來觀察，以免影響細胞的生長。

6.該細胞的生長環(huán)境比較敏感，需使用較好的血清培養(yǎng)。

7.建議使用未TC處理的瓶或者皿培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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